精品视频一区二区三区 细胞计数的实验步骤＆问题分析

细胞计数在细胞实验中是非常常见的，大多数实验室目前使用细胞计数板进行细胞计数，细胞计数板的结构如下图所示：

实验步骤

1.所用细胞密度达到一定要求后进行细胞计数铺板，提前准备好细胞计数板、盖玻片、计数器；

2.弃掉原有培养基，加入1ml温浴的PBS缓冲液清洗；

3.弃掉PBS缓冲液，加入胰酶消化细胞，消化时间根据细胞类型及日常经验决定；

4.消化相应时间后，加入二倍体积的培养基终止消化，用移液器将细胞全部吹下，转移至离心管内；

5.离心机室温800rpm,离心5min；

6.准备和所计数细胞种类相同的1.5ml Ep管，各加入PBS缓冲液980ul备用；

7.准备细胞计数板，并在计数区盖上盖玻片；

8.将5中离心结束的细胞弃上清，加入1ml培养基，充分混悬后取20ul加入到6中的Ep管中，充分颠倒混匀后取12ul加入牛鲍计数板一侧的计数区内，保证计数区充盈。

9.低倍显微镜（物镜4）下找到计数视野，上图中“"B C D E“"区为细胞计数区。

10.高倍镜（物镜10）下计数细胞，依次计数4个方格内的细胞数量。

11.计算细胞数量，假设4个方格内细胞总数为A,则每ml的细胞数量为：A/4×104×50（稀释倍数）=B个。

12.假设铺板所需细胞密度为1×104个/ml，则所需8中的细胞混悬液的量为：1×104×C（培养基所需毫升数，如6孔板每孔加培养基2ml）/B=D ml，最后换算成μl即可。

13.铺板：取C ml培养基，加入8中细胞混悬液D μl，充分混匀后依次加入培养皿中，放入细胞培养箱内即可。

4.细胞混悬液加入细胞计数板时，建议使用10μl小枪头、2-20μl移液器，枪头倾斜抵住盖玻片边缘，缓慢加入，务必保证细胞混悬液全部加入，计数区充盈。

关于细胞计数，以如下实例来充分理解上述计算过程：

4.铺板：培养基5孔（为防止不够所以多准备1孔）2ml×5孔=10ml加入细胞混悬液800μl，混匀加入六孔板即可。

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