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细胞培养无小事，需注意的四个事项！2021/9/22
培养细胞的*培养基一般由基础培养基（如MEM）和添加剂（血清或细胞生长因子）组成，培养基的配方都会随着细胞需要的营养不断的改进，而抗生素也是，广谱抗生素使用太多，会导致细胞的耐受性提高，从而产生抗性，...
如何通过细节挑选血清？2021/9/22
体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质无任何抵抗力，挑选血清是一个很艰难的决定，有些血清可能前期养细胞没有看到多大的问题，但是养着养着细胞突然暴毙，之前我们一直以为是细胞或者培养基的问题，后来给血清...
分享哺乳动物细胞培养的9个基本技巧！2021/9/22
一、净化空气在开始任何组织培养工作之前，打开新风系统至少15分钟，确保有清洁的空气流入。要始终确保没有任何东西覆盖它。每周打开紫外线灯3-4次，最多半个小时，可以帮助保持你的实验室无污染，但你应该记住...
怎么培养好的你细胞？2021/9/22
细胞培养是细胞和分子生物学的主要工具之一，提供研究细胞正常生理学和生物化学的优秀模型系统（例如，代谢研究、衰老）、药物和有毒化合物对细胞的影响，突变和致癌。它还用于药物筛选和开发，以及大规模生产生物化...
消除细胞聚团就是这么简单！2021/9/22
当在生长培养基中进行单悬浮细胞培养时，样本中出现细胞丢失的情况并不少见。当细胞破裂时，它们会释放DNA和碎片，导致细胞聚集成大团块，使其难以扩张。细胞聚团既可导致细胞凋亡，也可引起细胞死亡。随着更多的...
清晰的条带是这样跑出来的——western blot八大秘诀！2021/9/17
1.制胶：先制分离胶，再制浓缩胶，严格按照制胶说明书来就可以了。需要注意的一点是制胶一定要混匀！混匀！混匀！个人经验是每加一种试剂，就混匀一下，直到最后一种试剂加完。对于初学者，还要区分制胶的玻璃板是...
如何在WB中顺利获取大分子蛋白？2021/9/17
分子量大于150Ka的蛋白，经常折磨我们实验人。想当初，辛辛苦苦忙到深夜，结果发现显影空空如也。连续几个月如此，内心是何等抓狂。当大分子条带第一次出来的时候，心里特别开心，就像见到了初恋情人一样。看到...
如何优雅地获得漂亮小分子蛋白条带2021/9/17
做过Western-Blot的童鞋知道，分子量小于30KDa的蛋白分子不容易做。小分子蛋白虐我千百遍，我待小分子蛋白如初恋。抱怨是没用的，想方设法解决问题才是正道。一次又一次的调整方案，一次又一次的徒...
分享总结Western跑磷酸化蛋白的要点2021/9/17
抗体工欲善其事必先利其器，抗体很关键。这里我们要说的并不是最贵的就是好的，如果条件允许，建议同时购买不同厂家的抗体，一起来试一试，因为有时候即使是好的品牌，不同批次稳定性也不一样。抗体从订购到到货有一...
盘点RACE技术的几种类型及特点2021/9/16
在分子生物学中，未知基因全长序列的获取是研究新基因的重要步骤。当我们不清楚目的基因的完整序列时，获得未知序列的方法有反向PCR、mRNA差异显示技术、基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等等.......
搞定内参，驾驭 Western blot 已成功一半2021/9/15
westernblot对绝大多数实验新人而言，绝对是心中痛，一碰就要抓狂。没办法,谁让导师发话了，WB做不好，延毕就是分分钟的事儿。这还真是让小伙伴们感叹道，WB想说爱你不容易。那么为了*驯服WB，获...
用磷酸化抗体做Western Blot时，要注意哪些？2021/9/15
今天给大家分享一下在用磷酸化抗体做WesternBlot时，应该注意些什么。1.警惕内部敌人一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，因为组织或细胞裂解时会释放出...
Western blot实验结果分析2021/9/15
Westernblot实验结果分析①微笑条带解析：由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶处理办法：配胶时一定要充分混匀，待其充分凝固后再做后续试验②带出现纹理现象解析：样品不溶性颗粒处理...
WB的免疫印迹操作分享2021/9/14
①膜处理（甲醇1min，风干（放滤纸上），甲醇1min，水1min）②封闭（用TBST配5%牛奶）1h配摇床③加一抗，牛奶稀释,所需浓度参考抗体说明书，看膜的大小配多少一抗，4°过夜。④室温孵育20m...
WB过程中最重要的环节——转膜2021/9/14
①跑到溴酚蓝距离最下缘25px时配电转液（tris3.03g，甘氨酸14.4g，甲醇100ml，定容至1L）②在电转液中剥胶，裁胶，剪膜，膜活化（甲醇1min，去离子水1min，电解液15min）③“...
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