植物原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins, OPC）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有ji强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。
测定原理：
在酸性条件下，植物原花青素 A 环上的间苯二酚和间苯san酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在 500nm 处有特征吸收峰，测定 500nm 光吸收值可计算原花青素的含量。
组成：
产品名称 | BD6002-100T/48S | Storage |
提取液： | 60%乙醇，自备 | 4℃ |
试剂一：液体 | 8%盐酸 10ml | 4℃ |
试剂二：粉剂 | 1 瓶 | 4℃避光 |
说明书 | 一份 |
试剂二：粉剂 0.1g×1 瓶，4℃避光保存，临用前加 10ml 甲醇溶解。测定工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照 1:1 混合。
空白工作液：临用前按照用量将试剂一和甲醇按照 1:1 混合。
自备仪器和用品：
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水、盐酸、无水乙醇和甲醇。
OPC 提取：
称取约 0.1g 样本，加入 2ml 提取液，匀浆后，60℃振荡提取 2h， 10000g，25℃，离心 10min，取上清待测。
测定操作表
1、分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。
2、操作表
| 对照管 | 测定管 |
样本（μl） | 40 | 40 |
测定工作液（μl） |
| 160 |
空白工作液（μl） | 160 |
|
混匀，30℃水浴 30min，于微量石英比色皿/96 孔板中检测 500nm 处吸光值，ΔA=A 测 定-A 对照，每个测定管设一个对照管。 |
OPC 计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.0194x+0.0006，R2=0.999
OPC 含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3
= 0.515×(ΔA-0.0006）÷W
V 样总：加入提取液体积，2ml； V 反总：反应总体积，0.2ml；V 样：反应中样品体积，0.04ml；W：样品质量，g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0097x+0.0006，R2=0.999
OPC 含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3
= 1.03×(ΔA-0.0006）÷W
V 样总：加入提取液体积，2ml； V 反总：反应总体积，0.2ml；V 样：反应中样品体积，0.04ml；W：样品质量，g
注意事项：
1、配制好的试剂二应尽快使用，4℃保存时间不超过一个月。
2、吸光度变化应该控制在 0.01～0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
3、*低检出限为 10μg/g。
