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精品啪啪一级免费视频 可溶性酸性转化酶试剂盒

时间:2025/4/2阅读:358
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可溶性酸性转化酶(Soluble acid invertase, S-AI试剂盒说明书

分光光度法 50 /24 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

蔗糖转化酶(InvertaseIvr催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pHIvr 分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI两种类型。

AI 的最适pH  35AI 分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AIB-AI)两种类型。S-AI 主要存在于细胞液泡或自由空间中,最适 pH  4.5~5.0(酸性),通过降解液泡中蔗糖,调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。

测定原理:

S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 510nm有特征光吸收,在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与S-AI 活性成正比。

组成:

 

产品名称

BN6011-50T/24S

Storage

提取液:液体

50ml

4℃

试剂一:液体

50ml

4℃

试剂二:粉剂

1

4℃

试剂三:液体

30ml

4℃

说明书

一份

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 25ml 试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 4℃保存;

自备仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取提取:

按照组织质量(g):提取液体积(ml) 15~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤和加样表:

 

试剂名称μl

测定管

对照管

样本

200

200



试剂一


800


试剂二

800


混匀, 37℃准确水浴 30min 后,95℃水浴 10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)

试剂三

500

500

混匀,95℃水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀, 510nm 处,蒸馏水调零,记录各管吸光值 A,如果吸光值大于 2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)ΔA=A 测定-A 对照

S-AI 活性计算:

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001x 为标准品浓度(μg/ml),y 为吸光值。

(1) 按蛋白浓度计算:

单位的定义:37℃mg 蛋白每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI 活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

(2) 按鲜重计算:

单位的定义:37℃g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI 活性(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.2mlV2:加入提取液体积,1mlT:反应时间,30min Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本鲜重,g


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