精品网站在线免费观看 过氧化物酶(POX)染色实验方法

实验原理

血细胞中的过氧化物酶(Peroxidase,POX或MPO)能分解试剂中的底物H2O2，释出新生态氧，使无色联/苯胺氧化为蓝色联/苯胺，后者与亚硝基铁qing化钠结合形成蓝黑色的颗粒，沉着于细胞质中。

实验方法

材料：

1.1%TMB

2.亚硝基铁qing化钠饱和溶液

3.1%过氧hua氢溶液

4.稀过氧hua氢溶液

5.瑞氏染色液

6.新鲜涂片(骨髓或者血片)、染色架、显微镜等

方法：

1.取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁qing化钠饱和溶液10?l，溶液呈淡棕黄色。

2.在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml，放置lmin后，再加稀过氧hua氢溶液0.7ml，染色6min。

3.自来水冲洗，待干，瑞氏染液复染15～20min。

4.自来水冲洗，待干，油镜镜检。

实验结果计算

细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。

（－）无颗粒沉着；

（±）颗粒细小，分布稀疏；

（+）颗粒较粗，局灶分布；

（++）颗粒粗大，分布较密，占胞质1/2~2/3；

（+++）颗粒粗大，呈团块分布，几乎布满胞质；

（++++）全部胞质均布满颗粒，可覆盖胞核。

注意事项

1.血涂片和骨髓片应该新鲜制作，涂片应该厚薄适宜；

2.TMB配置在85%~88%的乙醇溶液中效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差；

3.H2O2需新鲜配置，其浓度与加入量不能随意更改。涂片中粒细胞看不见颗粒，红细胞呈棕色或者绿色，即表示H2O2过浓。若H2O2加于玻片上无气泡，则表示无效；

4.染色液pH为5.5；

5.试剂应置于低温暗处，防止应光线照射而失效。