精品网站在线免费观看细胞因子实验过程如何完成标记任务

来源：上海一研生物科技有限公司 2025年03月27日 09:19

巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）是一种19.02kDa的造血生长因子，含有162个氨基酸残基。该蛋白的活性：形式为同源二聚体，由成骨细胞分泌。M-CSF可控制单核细胞、巨噬细f胞和骨髓祖细胞的生成、分化和功能。M-CSF能够通过结合其受体CSF-1R激活CSF-1信号通路。

标记：

1.将细胞培养基与EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU标记培养基。

2.提前将2×EdU标记培养基预热，然后将150微升2×EdU标记培养基与等体积细胞培养基混合，获得1×EdU溶液。

【注】：

①不建议替换全部培养基，这样可能会影响细胞增殖的速度。

②配置好的培养基建议现用现配，用量以没过细胞为宜。

3.孵育细胞2h，弃培养基。

【注】：

①培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态。

②大多数肿瘤细胞以及粘附细胞系均可采用2h的孵育时间。

4.以1xPBS清洗细胞两次，每次5min, 以除去未掺入DNA的EdU残留。

【注】：对于贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。

实验步骤：

1.将细胞以104-105个细胞/孔的密度接种在96孔板中，加入100μL培养基，含或不含待测化合物。在CO2培养箱中在37℃下培养细胞24小时。

2.向板中加入10μL不同浓度的待测物质。

3.在培养箱中将培养板培养适当时间（如6、12、24或48小时）。

4.向板的每个孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要将气泡引入孔中。

5.将平板在培养箱中孵育1-4小时。

6.在读板之前，在定轨振荡器上轻轻混匀。

7.使用酶标仪测量450nm处的吸光度。

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