暗场生物显微镜是一种利用斜射照明法,以反射光和衍射光来观察标本的光学显微镜,以下将从其原理、结构、使用方法、应用场景等维度展开详细介绍:
工作原理
阻挡直射光:通过在聚光镜下方设置不透明的光阑或使用特殊设计的暗场聚光镜,阻挡透过标本细节的直射光,使光线从侧面以倾斜角度照射到标本上。
光的散射与反射:当倾斜光线照射到标本上时,标本中的微小颗粒或结构会使光线发生散射、反射和折射。这些散射光和反射光进入物镜,而其他未与标本相互作用的直射光则无法进入物镜,从而在暗背景上形成明亮的物体影像。
关键部件
暗场聚光镜:是暗场显微镜的核心部件,常见的类型有抛物面聚光镜、心形聚光镜和同心球面聚光镜。其作用是将光线以特定的角度会聚到标本上,产生斜射照明效果,使标本产生散射光和反射光。
物镜:用于收集标本散射和反射的光线,并将其放大成像。通常需要使用干燥系物镜中镜口率在0.85以下的物镜,以避免除微粒子反射的光束以外的旁射光束进入物镜前透镜,干扰暗视野成像效应。
光源:由于暗场显微镜中光能损失较大,因此需要选择光强较大的光源,如卤素灯、汞灯或LED灯等,以提供足够的照明强度,使标本能够产生清晰的散射光图像。
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