精品视频一区二区三区 如何为不同应用场景选用不同灵敏度的支原体检测试剂盒！

支原体检测是细胞培养和相关生物制品的重要质控方案，但不同的应用场景需要选用不同的检测试剂盒。试剂盒的选择主要考虑几个因素：

1，质控的等级要求；

等级要求最高的，是细胞与基因治疗产品的最终检测，成品检测或放行检。可选高灵敏度检测试剂盒，需要较高的检测灵敏度，至少达到10CFU/每剂，特异性要求也最高，必须无假阳性，假阴性。相对应地，样本需要经过复杂的前处理过程，包括支原体富集，核酸抽提，然后采用高灵敏度QPCR检测试剂（扩增45个循环，阳性阈值定为40个循环）。高灵敏试剂对整个实验操作对环境和操作过程要求高，稍有疏漏，会出现假阳性或扩增曲线翘尾。

对于细胞和基因治疗产品中间研发过程的质控，等级要求可以适当放宽，灵敏度在100-10CFU是可以被接受的，并且很多情况下为了简化操作，往往采取直扩的方案，即直接在QPCR体系中加入细胞上清或悬浮液进行检测（扩增40个循环，阳性阈值定为35个循环）；若想进一步提高灵敏度可采取浓缩裂解的方案，即细胞上清通过高速离心后去掉上清，加入裂解液处理。

对于科研细胞房使用，可选用科研版直扩检测法，扩增35个循环，阳性阈值定为32个循环，实验对环境无菌要求不高，相应地，灵敏度要求也不高，直接上清加样，不需要对样本特殊处理，灵敏度在1000-100CFU，如若要节约成本，可采取混和样本检测。

2，经济成本；

高灵敏QPCR检测试剂盒，需要进行样本抽提，灵敏度高，需要配备荧光定量PCR仪，成本高；直扩QPCR检测试剂盒，不需要抽提和特殊样本前处理，灵敏度中等，成本中等；科研版支原体检测试剂盒，可混样检测，成本较低。

3，操作的复杂程度。

高灵敏QPCR检测法需要浓缩，抽提样本，可批量操作，操作难易程度中等，对实验人员有一定的要求，操作时间4-8小时；直扩QPCR检测法和科研版直扩法，操作比较简单，只需要加样上机即可，操作时间1-3小时即可。

结合以上因素，总结如下：

高灵敏度：高灵敏支原体QPCR检测试剂盒（成品放行检，提高速率，但成本中等）。

快速便捷：直扩支原体QPCR检测试剂盒（平衡速度与成本，设备要求低，适合中间质控环节）。

    成本至上：科研版支原体检测试剂盒（节约成本，适合科研细胞实验室）。