一、Zymo甲基化试剂盒核心技术特点
1. 高效亚硫酸盐转化
-转化率>99%:采用优化的亚硫酸盐处理体系(如EZ DNA Methylation-Gold™),确保未甲基化胞嘧啶全部转化为尿嘧啶,甲基化位点保留完整。
- 快速处理:全程仅需3小时(Lightning系列)至6小时(Gold系列),比传统方法缩短50%时间。
2. 广泛样本兼容性
- DNA类型:适用于基因组DNA(≥50 pg)、FFPE样本(需预修复)、cfDNA(≥1 ng)。
- 污染物耐受:可处理含10% SDS或1%血红蛋白的样本(需配合Zymo Clean & Concentrator纯化)。
3. 高灵敏度与重复性
- 检测下限:甲基化频率 0.1%(如用于肿瘤早筛的ctDNA检测)。
- 批间差异:CV <5%(基于NIST标准品验证)。
二、Zymo甲基化试剂盒与主流产品线对比
三、Zymo甲基化试剂盒典型应用场景
1. 肿瘤表观遗传研究
- 早筛标志物验证:检测ctDNA中 SEPT9、SHOX2 等基因甲基化(灵敏度95%)。
- 甲基化分型:基于850K芯片数据构建TCGA样甲基化亚型(如胶质瘤IDH1突变关联)。
2. 发育生物学
- 单细胞甲基化分析:配合Zymo PicoMethyl™ 试剂盒,处理单细胞DNA(适用于10-100个细胞)。
3. 植物表观遗传学
- 环境胁迫响应:检测 CpG岛 和 CHH位点 甲基化动态(需配合BS-Seq分析)。
四、Zymo甲基化试剂盒操作流程优化建议
1. DNA质量控制
- 使用Nanodrop检测A260/A280(1.8-2.0),A260/A230 >1.8。
- FFPE样本需先进行 脱蜡修复(推荐Zymo FFPE DNA Kit)。
2. 转化条件优化
- 高温变性步骤:98℃ 8分钟(Gold系列)→ 95℃ 30秒(Lightning系列)。
- 转化后纯化:使用Zymo-Spin IC Column去除亚硫酸盐残留(回收率>90%)。
3. 下游兼容性
- PCR扩增:推荐使用ZymoTaq™ PreMix(抗尿嘧啶干扰,扩增效率提升30%)。
- NGS建库:配合Methyl-Seq Library Kit(UMI标记,降低扩增偏差)。
五、Zymo甲基化试剂盒与竞品性能对比
六、Zymo甲基化试剂盒用户反馈与解决方案
- 常见问题:
1. 转化后DNA片段化 → 缩短变性时间至5分钟,使用低熔点琼脂糖包埋。
2. PCR扩增失败 → 增加2-4个热启动循环(98℃ 10秒→60℃ 30秒)。
3. 批次间差异 → 使用同一批次转化柱,避免不同温度环境操作。
- 技术支持:提供 免费实验方案优化服务(48小时内响应)。
【总结】
Zymo甲基化试剂盒在转化效率、速度、小样本兼容性 方面表现很好,尤其适合肿瘤液体活检和单细胞表观遗传研究。
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