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慢病毒背景
慢病毒载体（Lentiviral vectors, LVs）是在人免疫缺陷病毒HIV-1的基础上改造而来的，可以将大量的遗传信息传递进宿主细胞，并且整合到细胞的基因组内，使其可以在细胞内稳定表达若干代。同时，由于它的毒力基因已经被剔除，作为假病毒可以在实验室内较为安全的使用。慢病毒载体可以转染多种细胞，包含原代细胞等难转染的细胞。
慢病毒在Car-T细胞疗法中的应用
基于慢病毒具有：
感染范围广、效率高，有效感染分裂和非分裂的细胞；
稳定性强，整合进基因组中，长期稳定表达外源的基因；
免疫原性低，安全性相对较高的特点，慢病毒被广泛应用于细胞治疗中。
CAR-T（Chimeric Antigen Receptor T-cell，嵌合抗原受体T细胞）疗法是一种突破性免疫疗法，通过基因改造患者的T细胞，使其表达特定的CAR（嵌合抗原受体），从而识别并杀伤肿瘤细胞。目前主要用于血液系统恶性肿瘤（如B细胞白血病、淋巴瘤），并逐步向实体瘤拓展。
慢病毒整合的特性
慢病毒是目前CAR-T主流转导方式（FDA已批准的CAR-T产品中，约90%采用LV），慢病毒整合在细胞内是半随机整合（偏好转录活跃区）。
1
慢病毒通过识别宿主表面受体，把RNA和蛋白转运至胞内；
2
病毒RNA逆转录形成线性 双链cDNA（含两端LTR序列）
3
整合酶识别LTR,cDNA被整合到宿主基因组中；
4
外源基因随宿主细胞分裂持续表达。
整合偏好性：
整合位点分析（Integration Site Analysis, ISA）是基因治疗产品（如CAR-T）临床开发和上市后监测的关键环节，其法规要求由各国监管机构（如FDA、EMA）制定，旨在评估基因组整合的潜在风险（如插入突变、克隆扩增）。
目前检测ISA的方法有LM-PCR、NGS、单细胞测序等，为了保证检测的准确性，科佰生物开发了一系列慢病毒整合位点标准品供检测机构使用，作为品质衡量的标尺对检测能力进行判别。在前文 慢病毒整合位点标准品强势来袭一文中，已对单克隆多插入位点、单克隆单插入位点、性染色体插入位点 做了产品的说明及数据展示。近期科佰推出了5% 2% 整合频率的慢病毒多克隆多整合位点参考品，由多个单克隆整合位点产品混合而来，覆盖20个插入位点，分别来自11个不同染色体上的20个基因，如下表所示
Figure 1. 基因分布
Figure 2. 染色体分布
每个位点经过LM-PCR（用于识别已知DNA与相邻未知DNA的一种技术，可结合NGS，对IS进行高通量分析）、 NGS（捕获探针法测序）技术检测，Sanger测序验证，以及dPCR检测定标整合频率，确保插入位点的准确定位和整合频率的精准测量。
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如果您对我们的慢病毒多整合位点标准品感兴趣，或希望了解更多信息，请联系我们的销售团队。我们将竭诚为您提供优质的产品和服务，助力您的实验室实现更精准、更高效的检测。
产品列表
货号 | 名称 |
CBPL0007 | 慢病毒多克隆多整合位点参考品-5% |
CBPL0008 | 慢病毒多克隆多整合位点参考品-2% |
部分数据展示：
5% chr3：4871944 ITPR1四种检测结果：
LM-PCR结果
NGS结果
Sanger结果
3'LTR+ITPR1 chr3_4871940
ITPR1 chr3_4871944+5'LTR
dPCR结果
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