无菌技术主要包括
1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒;
2、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进行灭菌;
3、为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行,
4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触
一、倒平板
1、培养基灭菌后,需冷却至50℃左右时才能倒平板。
2、左手拿培养皿,右手拿锥形瓶,左手拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,不要打开。
3、整个操作在酒精灯火焰旁进行,避免杂菌污染。
4、平板冷却后要倒置的原因:防止皿盖上的冷凝水落入培养基,造成污染。
5、若倒平板时,培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板应丢弃。
二、平板划线操作
次划线及每次划线之前都要灼烧灭菌,划线操作结束仍需灼烧接种环,每次灼烧目的总结如下表:
1、将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红;2、在火焰旁冷却接种环,并打开盛有菌液的试管的棉塞;
3、将试管口通过火焰;4、将已冷却的接种环伸入菌液中,沾取一环菌液;
4、将试管口通过火焰,并塞上棉塞;6、左手将皿盖打开条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖。注意不要划破培养基。
7、灼烧接种环,待其冷却后,从区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作,在三区域内划线。注意不要将-区域的划线与-区相连。8、将平板倒置,放入培养箱中培养。
三、稀释涂布平板
1、稀释操作时:
每支试管及其中9mL水、移液管均需灭菌;操作时,试管口和移液管应在离火焰1-2cm处。
2、涂布平板时:
①涂布器用70%酒精消毒,取出时,多余酒精在烧杯中滴尽,沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。
②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中,以免引燃其中的酒精。
③酒精灯与培养皿距离要合适,移液管头不要接触任何物体。
三、摆斜面
装在试管中的琼脂培养基,在灭菌完成后,趁热立即摆放在木棒(或玻璃棒)上,并成适当的斜度,冷却后,琼脂凝固即成斜面。斜面长度不用超过试管二分之一。
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