质量光度计(MassPhotometer)是一种用于单分子定量分析的仪器,主要通过测量生物大分子溶液中分子的质量来实现对样品的分析。以下从技术原理和实际应用角度,分析其核心优点:
一、无需标记与固定,保留分子天然状态
避免人为干扰:传统单分子检测技术(如荧光显微镜)需对分子进行荧光标记或固定在基底上,可能改变分子构象、活性或相互作用。
质量光度计通过光学反射原理直接测量溶液中分子的质量,无需任何化学修饰,确保分子处于天然溶液环境,数据更真实反映生理状态。
适用范围广:可检测蛋白质、核酸、病毒颗粒、纳米颗粒等多种生物大分子,尤其适合结构动态变化敏感的样品(如膜蛋白、蛋白复合物)。
二、单分子定量,高精度测量绝对质量
绝对质量测定:直接给出单个分子的绝对质量(单位:kDa),而非相对信号强度。例如,可区分同源蛋白的不同亚型(如100kDa与105kDa的差异),或检测翻译后修饰(如磷酸化、糖基化)引起的质量变化。
单分子统计分析:通过统计大量单分子数据(通常检测数万至数百万个分子),提供质量分布直方图和群体异质性分析,可识别样品中的杂质、聚集体或构象异质性。
例:在抗体药物分析中,可区分单体、二聚体与降解片段的比例。
三、操作简便,快速获取结果
无需复杂样品制备:仅需将样品稀释至合适浓度(通常为nM至μM级),即可直接上样检测,避免传统方法(如超速离心、凝胶电泳)的繁琐流程。
实时动态监测:支持时间分辨测量,可追踪分子组装/解聚过程(如病毒衣壳组装、淀粉样纤维形成)或酶促反应中的质量变化,实时生成动力学曲线。
高通量筛选:部分型号支持多孔板(如96孔板)自动检测,适合药物筛选、蛋白稳定性优化等需要大量样品对比的场景。
四、多场景适用性与兼容性
溶液环境兼容性:可在生理缓冲液、细胞膜模拟环境(如脂质体)、甚至细胞裂解液中直接检测,贴近真实生物环境。
与其他技术联用:可与色谱(如SEC-MP,尺寸排阻色谱-质量光度法联用)结合,分离后实时检测各组分的质量,提升复杂样品的分析能力。
跨学科应用:不仅限于生物学,还可用于材料科学(如纳米颗粒粒径分析)、食品科学(如乳蛋白聚集体检测)等领域。
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