精品网站在线免费观看 原代细胞提取——取材、分离、培养、纯化！

百欧博伟生物：细胞实验是科学研究中较为常见的实验，其中原代细胞以其和反映体内生长特性的特点，在细胞实验中被广泛应用。

那么，什么是原代细胞？

原代细胞是指来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞。初代培养物次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。原代细胞的提取主要包括取材、分离、培养、纯化，本次将主要介绍原代细胞的取材与分离。

取材：取材是原代细胞提取的步，也是原代细胞培养成功的首要条件。取材前需要注意组织类型、分化程度、年龄等；注意避免机械损伤，去除无用组织，同时避免干燥，最重要的是要严格控制无菌。另外，整个取材过程，在保证无菌的条件下，尽量快速完成，以保证样本的新鲜和细胞活性。血液、骨髓、羊水等取材，不仅要严格控制无菌，还需要注意抗凝。

分离：取材完成后，需要尽快采用适当的方法将细胞分离出来。

一、悬浮细胞的分离

将取材得到的血液、羊水、胸水或腹水等进行低速离心，1000r/min，5-10min；收集细胞沉淀，用PBS（不含钙、镁）洗两次，再用培养基洗一次，最后用培养基重悬细胞，调整细胞浓度后分瓶培养。若想要提取的细胞不在沉淀中，而是在细胞悬液中，则需要加入细胞分层液，经离心后，由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，从而分离出细胞。

二、实体组织中细胞的分离

1、机械分散法

首先用剪刀和吸管将组织剪切并吹打分散细胞，然后将已充分剪碎分散的组织放在注射器内使细胞通过针头压出，最后在不锈钢网内用钝物挤压将细胞从网孔中压挤出。

这种分离细胞的方法简便、快速，适合纤维成分少的软，部分胚胎组织等，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。

2、消化分离法

这个方法就是将组织剪切成小块，再利用酶（胰蛋白酶和/或胶原酶）的生化作用和/或非酶（EDTA）的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，再结合机械法（用吸管吹打分散或电磁搅拌）使细胞团块得以较充分的分散，制成细胞悬液。

酶或非酶的选择需要根据组织及细胞的特性进行选择。一般来讲，胰蛋白酶适合用于消化软组织，胶原酶适合消化纤维较多的组织，而EDTA则对上皮组织分散效果较好。另外，也可以将EDTA与胰蛋白酶以1:1或1:2的比例混合使用，这样不仅利于细胞脱壁又利于细胞分散，可降低胰蛋白酶的用量和毒性作用。

这种方法还需要注意的是，组织块需要使用PBS（不含钙、镁）漂洗2-3次以去除组织中的钙、镁离子和血清对胰蛋白酶和EDTA的抑制作用；同时，胰酶浓度不宜过高，作用时间不能太长，以免过量损伤细胞；消化后的组织要尽量轻柔地弃去消化液。

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