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精品视频一区二区三区 神经元细胞培养|实验技术服务

来源:上海拜力生物科技有限公司   2015年05月15日 12:42  

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产品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
测序实验流程:
实验方法原理     SD胎鼠脑皮层神经元体外培养7 d,微量移液器塑料滴头于培养孔内机械性划割培养之神经元,依划割程度不同分为轻、中、重3组,对照组除不进行机械性划割,其余处理同损伤组,伤后不同时间点(10,30min , 1,3,6,12,24 h)检测细胞存活率及培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)含量。
实验材料    SD大鼠
试剂、试剂盒    硼酸硼砂缓冲液胰酶-EDTA 消化液D-Hanks’
仪器、耗材    眼科剪滴管离心机培养皿 CO2培养箱
实验步骤    
1. 孕16 d SD 大鼠经戊巴比妥钠麻醉后,碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤,依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜,无菌操作下取出胚胎放入预冷的 D-Hanks’平衡盐液中。
2. 在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层,除去脑膜,剪碎组织成约1mm3 大小,加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱内消化20 min,中间摇晃一次。
3. 随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM+10%FBS)的离心管内终止消化液作用5 min。
4. 用滴管吸出组织转移到装有预冷的 DMEM+10%FBS 的离心管内,用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次,静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤 2~3 次。
5. 将所收集的上清经200 目筛网过滤。
6. 过滤后的细胞悬液于800 rpm 离心5 min,弃上清,管内加入新鲜培养液(DMEM+20%FBS)并吹打 成单细胞悬液。
7. 细胞计数,调整细胞密度按1.5×105/cm2  种入6 孔板内,放入CO2 孵箱中培养。培养48 h 后换液并 加入Ara-C使其终浓度为 1×10-5 mM/L。Ara-C作用24 h 后全量换液。以后每隔 3 天半量换液一次。

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