单细胞铺板是细胞实验中常见又必须掌握的一门技术，看似简单，我们却经常遇到：如细胞居中或者中间稀疏等不均匀分布的现象，导致我们只能扔掉，重新铺板。既耽搁时间又浪费了细胞及培养板等资源。历经多次失败后，才发现原来单细胞铺板是有规律可循的，今天我们就聊一聊：细胞铺板的技巧。

　　首先，了解一下单细胞铺板的必要性!

　　从经济和的角度来说，需要根据实验目的选择不同规格的培养板。如在进行药物对待测细胞半抑制率(IC50)测试时，通常使用96孔板，一方面可以设置浓度梯度;另外还可一次性测多个药物，减少实验误差。

　　下面我们再来了解一下单细胞铺板可能会出现的问题

　　1、细胞计数前后出现较大误差?

　　考虑细胞沉降导致悬液不匀;悬液体积过大或过小;稀释倍数太高或太低等原因造成。

　　2、如何克服细胞悬液不均匀的问题?

　　尽量将细胞吹打为单个，防止抱团，且用移液枪充分吹打，使其均匀悬浮在培养基中。

　　3、一般加多少细胞悬液合适?

　　由于加入计数室的量，过少会导致计数室内出现气泡，过多则会使得计数板上的盖玻片不紧贴计数板，使得高度变高，体积变大;计数室体积为9mm3，所以一般加15ul左右。

　　4、计数时，细胞稀释倍数如何控制?

　　若是计数室细胞过稀或过密，会造成较大误差，一般适浓度为5～10×105细胞/ml。如一般10cm皿的细胞约300-500万个，一些细胞个体小也能达到1000-2000万，可根据所需细胞数目取出部分作稀释或连续稀释后计数。举例来说可将100ul细胞悬液加入到900ul培养基中，混匀后进行计数，计数所得乘以10即为实际细胞密度。

　　5、计数的原则有哪些?

　　计数时对压在外圈边线的细胞遵循“计上不计下，计左不计右”的统计学原则，遇到两个以上的细胞组成的细胞团计为一个细胞。