今天跟大家分享一下关于单克隆分离的方法有哪些吧，下面让我们一起来看看吧。

　　一、有限稀释法

　　材料：

　　a、96孔细胞培养板等;

　　b、HT培养基;

　　c、活力强的杂交瘤细胞;

　　d、小鼠腹腔细胞。

　　方法：

　　a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。

　　b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞三种不同的稀释度。

　　c、按每毫升加入5×104-1×105细胞的比例，在上述杂交瘤细胞悬液中分别加入腹腔巨噬细胞。

　　d、每种杂交瘤细胞分装96孔板一块，每个稀释度32孔，每孔量为0.2ml，每孔的杂交瘤细胞数分别为0.5、3和10。

　　e、37℃、7.5% CO2湿润培养7-10天，出现肉眼可见的克隆即可检测抗体;在倒置显微镜下观察，标出只有单个克隆生长的孔，取上清作抗体检测。

　　f、取抗体检测阳性孔的细胞扩大培养，并冻存。

　　g、本法中(b)、(c)、(d)也可简化为将计数后的杂交瘤细胞准确地进行系列稀释，直至每毫升含10个细胞，按每孔接种0.1ml细胞悬液，即每孔含1个细胞。

　　二、软琼脂法

　　材料：

　　a、HT培养基(双倍浓度)。

　　b、用0.15mol/L NaCl配制的2.0%琼脂糖：称取2.0g细胞培养用琼脂糖，悬浮于100ml 0.15mol/L NaCl，121℃高压灭菌15分钟，分装10ml小瓶，冷却后4℃保存。

　　c、小鼠腹腔细胞。

　　d、灭菌平皿。

　　e、45℃水浴。

　　f、活力很好的杂交瘤细胞。

　　方法：

　　a、在培养皿中制备饲养细胞(小鼠腹腔细胞)单层。

　　b、临用前将2.0%琼脂糖生理盐水溶液与等量双倍浓度的HT培养液混匀，配成1%琼脂糖培养液，45℃水浴中温育。

　　c、吸去平皿上层培养液，加入1%琼脂糖培养液3ml，室温10分钟。

　　d、取杂交瘤细胞悬液1ml，加入1%琼脂糖培养液1ml混匀，铺于上层。

　　e、37℃、7.5%湿润培养7-14天;克隆生长至2mm时，用毛细吸管吸出克隆，直接转种于含有饲养细胞的24孔板，扩大培养。

　　f、吸取上清，检测抗体，阳性孔可继续克隆化，或扩大培养、冻存。