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DNA 甲基化测序常用方法2021/8/26
随着高通量测序技术（NGS）技术的发展，使我们能够从全基因组水平来分析5’甲基胞嘧啶及组蛋白修饰等事件，由此能够发现很多传统的基因组学研究所不能发现的东西，这就是所谓的“DNA甲基化测序”！DNA甲基...
电泳中的异常现象及其原因分析2021/8/26
跑电泳是分子生物学实验的一项基本技术。只要做分子生物学方面的实验，可能或多或少，或早或晚都要跑跑电泳。有时候，跑电泳跑着跑着也会出现一些奇奇怪怪的现象。下面，谈一谈跑电泳的过程中可能会发生的异常现象，...
【DNA 电泳】教你做果冻：琼脂糖凝胶电泳实验技巧分享2021/8/26
果冻晶莹剔透，口感QQ的，其实果冻的原料琼脂糖，也是我们平时用来跑电泳的材料，琼脂糖凝胶电泳实验常用以DNA切胶回收，DNA分离和用于佐证DNA是否重组、质粒等是否切开。今天我们就来聊聊琼脂糖凝胶电泳...
【教程】构建载体其实一点也不难！2021/8/26
我们在研究基因的功能时，逃脱不掉的就是为了我们的实验目的，可能需要构建各种载体，比如表达载体，克隆载体，基因打靶载体等等。很多人在构建载体的时候都感觉很困难，特别是对于一个刚进入实验室的新人来说那更是...
表达融合蛋白时，如何把两个基因拼接起来？2021/8/26
A君：我要表达一个ras加GFP融合蛋白，怎么设计引物？安培君：你的GFP标签蛋白在载体里还是要你自己插进去？A君：是我自己插进去。安培君：你打算怎样融合？A君：是不是这样？酶切A基因，酶切质粒，把A...
教你如何做分子构建，从此迈向科研达人！2021/8/25
做过分子实验的人都知道，要想做的有效率有质量是很苦逼的，1个月做100个克隆那都是小case，没点看家的本事怎么行。如果再遇到比较稀有的基因，周旋个把月，那也是家常便饭。下面就和大家分享一些载体构建的...
学学序列拼接，想节省费用的千万别错过！2021/8/25
相信大家PCR之后一般要进行测序以保证扩增序列的正确性吧？由于测序能力的限制，目前好的公司也只能保证一个反应800bp测准。如果大家的克隆片断大于1k，那么势必要同时测两个反应，然后将两个反应得到的序...
你真的了解 TA 克隆吗？2021/8/25
首先，TA克隆是用于PCR产物的克隆和测序。原理是利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR产物...
上图！教你秒懂重组 DNA 技术常用工具酶！2021/8/25
1分子剪刀——限制性内切酶：作用：识别特异序列，切割DNA限制酶的命名是根据细菌种类而定，以EcoRI为例：2胶水——DNA连接酶作用：跟限制性内切酶对着干，催化DNA中相邻核苷酸间形成磷酸二酯键，使...
如何解决酶切切过头的问题？2021/8/25
之前谈到了酶切切不动的问题。这一次，我们探讨一下酶切的另外一端：酶切切过头的问题。还是按照一贯的做法和思路，发现主要是两个原因导致的，解决办法也是有的。一、酶切时间过长酶切时间过长的确有时候会对目的条...
【技术】酶切、酶切，切还是不切？2021/8/24
酶切，作为一种常用的分子克隆的手段，如果应用得当，可谓宝刀屠龙，无往而不利；如果应用不当，又会步步维艰。真是让人欢喜让人忧愁。酶切，最常见的问题就是切不动和切过了。这些问题比较复杂。下面，先讲一讲切不...
琼脂糖凝胶电泳、酶和试剂的使用等一些注意事项2021/8/24
基因克隆在发明后的32年，需求一直不断增加，但是有些小伙伴的重组质粒就是怎么样都构建不出来。其实，看似简单的传统基因克隆，可是存在着重重陷阱！美国罗林斯研究中心（RollinsResearchCent...
DNA载体构建——【干货】三图让你秒懂质粒图谱2021/8/24
很多人拿到一个质粒图谱，第一反应只能是仰天长啸，这是什么玩意？这些ori、RBS、tet是什么鬼？这些箭头代表什么，转录的方向吗？为什么都不相同，不会“撞车”么？来，看几张图，上面的问题就能一一破解。...
为什么不能用质粒DNA抽提试剂来提取基因组DNA？2021/8/24
导读为什么同样抽提质粒DNA的试剂不能用来抽提基因组DNA呢？差别很大么？要买两种试剂盒真是麻烦啊！你还不要不相信，有小伙伴试过，还真没抽提出来。今天小编就来和大家一起探究下原因！基因组DNA的抽提，...
【技术贴】DNA 纯化实验的几种常用方法2021/8/24
DNA纯化是分子生物学研究中经常需要用到的一种方法。一般来说，做DNA纯化有3个目的：1.获得高纯度的DNA；2.浓缩DNA；3.用DNA做测序，芯片等生物信息学方面的实验。下面，谈一谈DNA纯化的几...
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