全自动氨基酸分析仪基于离子交换色谱原理,结合茚三酮柱后衍生和光度法检测技术,实现对氨基酸的高效分离与定量分析。其核心在于利用阳离子交换树脂对氨基酸的特异性吸附作用,结合流动相的pH梯度洗脱,实现复杂样品中氨基酸的精准分离。
技术原理
氨基酸混合物在流动相(缓冲溶液)推动下,流经装有阳离子交换树脂的色谱柱。不同氨基酸因结构、酸碱性、极性差异,与树脂中的交换基团发生离子交换,吸附能力不同。通过调节洗脱液的pH值和离子浓度,氨基酸按洗脱能力顺序逐一释放。洗脱出的氨基酸与茚三酮试剂在柱后反应器中混合,于115-120℃下发生显色反应,生成紫色或黄色化合物。这些有色产物在570nm(紫色)和440nm(黄色)波长下的吸光度与氨基酸浓度呈线性关系,符合朗伯-比尔定律,从而实现定量分析。
工作流程
样品处理:蛋白质样品需经酸水解或酶解,将蛋白质分解为游离氨基酸。游离氨基酸样品可直接上样。
氨基酸分离:样品注入色谱柱后,通过三梯度分离技术(温度、浓度、pH梯度)优化分离效果,确保难分离组分(如色氨酸)的分离度。
检测与数据处理:分离后的氨基酸与茚三酮反应生成有色产物,经可见光检测器检测吸光度。仪器自动绘制色谱图,通过峰面积计算氨基酸含量,并生成定量报告。
该技术具有高灵敏度(检测限可达3-50pmol)、高重现性(峰面积重现性RSD≤1%)和自动化程度高的特点,广泛应用于食品、医药、农业等领域。
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